X-gal: различия между версиями

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Интерактивная навигация по истории
[отпатрулированная версия][отпатрулированная версия]
← Предыдущая правка
Содержимое удалено Содержимое добавлено
ВизуальныйВики-текст
Нет описания правки
Спасено источников — 1, отмечено мёртвыми — 0. Сообщить об ошибке. См. FAQ.) #IABot (v2.0.9.5
 
(не показаны 22 промежуточные версии 8 участников)
Строка 1: Строка 1:
{{Вещество
{{Вещество
| заголовок = 5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид
| заголовок = <!-- заголовок карточки (по умолч. совпадает с назв. страницы) -->
| картинка = X-Gal.svg
| картинка = X-Gal.svg
| картинка3D = <!-- имя файла -->
| картинка3D = <!-- имя файла -->
Строка 9: Строка 9:
| сокращения = <!-- принятые сокращения названия -->
| сокращения = <!-- принятые сокращения названия -->
| хим. формула = C<sub>14</sub>H<sub>15</sub>BrClNO<sub>6</sub>
| хим. формула = C<sub>14</sub>H<sub>15</sub>BrClNO<sub>6</sub>
| эмпирическая формула = <!-- например: С{{sub|2}}H{{sub|6}}O -->
| отн. молек. масса = <!-- число, в а.е.м. -->
| молярная масса = 408,629
| молярная масса = 408,629


Строка 34: Строка 32:
| энтальпия образования = <!-- число, в кДж/моль -->
| энтальпия образования = <!-- число, в кДж/моль -->
| удельная теплота парообразования = <!-- число, в Дж/кг -->
| удельная теплота парообразования = <!-- число, в Дж/кг -->
| удельная теплота парообразования2= <!-- число, размерность -->
| удельная теплота плавления = <!-- число, в Дж/кг -->
| удельная теплота плавления = <!-- число, в Дж/кг -->
| удельная теплота плавления2 = <!-- число, размерность -->
| тепловое расширение = <!-- число (безразм.) -->
| тепловое расширение = <!-- число (безразм.) -->
| интервал трансформации = <!-- число, в ° -->
| интервал трансформации = <!-- число, в ° -->
Строка 74: Строка 70:
}}
}}


'''X-gal''' (также '''BCIG''' от {{lang-en|bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside}}) — органическое соединение, состоящее из [[галактоза|галактозы]], соединенной с [[индол]]ом. Очень широко используется в качестве [[субстрат (биохимия)|субстрата]] для [[бета-галактозидаза|бета-галактозидаз]] в [[генетическая инженерия|генетической инженерии]] и [[молекулярная биология|молекулярной биологии]].
'''X-gal''' (also abbreviated '''BCIG''' for bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) is an [[organic compound]] consisting of [[galactose]] linked to a substituted [[indole]]. It is very heavily used in [[molecular biology]].


== Uses ==
== Применение ==
{{Редактирую раздел|[[User:Sirozha|Sirozha.ru]]|[[User:Sirozha|Sirozha.ru]] 14:42, 11 декабря 2010 (UTC)}}
=== Cloning ===
In [[Clone (genetics)|gene cloning]], X-gal is used to indicate whether a cell expresses the [[beta-galactosidase|β-galactosidase]] enzyme, which is encoded by the [[lac operon|''lacZ'' gene]], in a technique called [[Blue white screen|blue/white screening]].


=== Клонирование ===
X-gal is cleaved by β-galactosidase yielding galactose and 5-bromo-4-chloro-3-hydroxyindole. The latter is then oxidized into 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro-indigo, an insoluble blue product. Thus, if X-gal and an inducer of β-galactosidase (usually [[IPTG]]) is contained within an agar medium on a culture plate, colonies which have a functional ''lacZ'' gene can easily be distinguished.
X-gal используют при клонировании генов для определения экспрессии в клетке гена фермента [[бета-галактозидаза|β-галактозидазы]], закодированного в [[lac-оперон|гене ''lacZ'']].


X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется [[галактоза]] и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, [[IPTG]].
When a technique of cloning plasmid vector genes within bacterial cells is optimal, X-gal is used to visually locate yeast or ''[[E. coli]]'' colonies that have been [[Transformation (genetics)|transformed]] by the desired ''[[plasmid vector]]'' in a ''[[blue-white screen]]''. E. coli bacteria, which cannot produce the ''[[enzyme]]'' ''[[β-galactosidase]]'' (coded by lacZ gene of the ''[[lac operon]]''), are transformed by absorbing the plasmid vectors, which contain an insert in the ''lacZ'' open reading frame. After the transformation process, the bacteria is spread on nutrient agar plates, which mostly contain antibiotics as well. Most commercially available vectors contain an antibiotic-resistant gene. Successfully transformed bacteria has a truncated β-galactosidase gene, causing white colonies on the plate. Bacteria transformed by empty vectors, which does not contain an insert in the lacZ open reading frame, are now able to produce the enzyme β-galactosidase which can then cleave the X-gal present within the nutrient agar, resulting in a blue colony. Bacteria colonies that grew from bacteria that were not transformed does not contain the antibiotic-resistance, and thus, die. The plasmid vectors can also be coded to disrupt a different bacteria’s ability to produce β-galactosidase causing the desired bacteria colonies to grow to be white and non-transformed colonies to grow to be blue. This is the case with many commercially available cloning vectors, such as Promega’s pGem-T Vectors, which carry ''lacZ''α, a truncated form of β-galactosidase, and require specific ''E. coli'' hosts strains (such as DH5α) to achieve [[beta-galactosidase#Structure|α-complementation]].

X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний ''[[E. coli]]'' [[трансформация (биология)|трансформированы]] нужным вектором. В норме в клетках ''E. coli'' фермент, закодированный геном lacZ синтезируется под действием индуктора IPTG, а синее окрашивание теряется у клеток, содержащих генно-инженерную конструкцию, в которой ген lacZ нарушен в результате генетической вставки.


[[Файл:X-Gal reaction.png|550px]]
[[Файл:X-Gal reaction.png|550px]]


=== Reporter ===
=== Репортер ===
Ген ''lacZ'' может быть использован в качестве [[ген-репортер|репортерного]], при выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащей X-gal. В случае, когда промотор гена-мишени связан с кодирующей частью гена галактозидазы, связывание белка-активатора с промотором, приводит к образованию окрашенного продукта расщепления X-gal.<!--


--><ref name="joung">{{статья
The ''lacZ'' gene may be used as a reporter in combination with growth media containing X-gal. In [[two-hybrid analysis]] for example, it is necessary to distinguish between those yeast or bacteria in which there is a successful interaction, leading to the binding of an activation domain to a promoter, and those in which there is not. If the promoter is linked to a ''lacZ'' gene, the production of β-galactosidase will be indicated by the production of blue pigment by colonies that host a successful interaction.<ref name="joung">{{cite journal
⚫
|заглавие=A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions
⚫
|author=Joung J, Ramm E, Pabo C
|издание=[[Proceedings of the National Academy of Sciences|Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America]]
⚫
|title=A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions
|том=97
|journal=Proc Natl Acad Sci USA
|номер=13
|volume=97
|страницы=7382—7387
|issue=13
|pages=7382&ndash;7
⚫
|year=2000
|pmid=10852947
|pmid=10852947
|url=http://www.pnas.org/cgi/content/full/97/13/7382
|ссылка=http://www.pnas.org/cgi/content/full/97/13/7382
|doi=10.1073/pnas.110149297
|doi=10.1073/pnas.110149297
|pmc=16554
|pmc=16554
|язык=en
}}</ref> Due to its manual nature, this technique is limited to situations in which the number of colonies that must be distinguished is less than around 10<sup>6</sup>.<ref name="joung"/> The successful cleavage of X-gal also creates a noticeably foul odor due to the volatilization of [[indole]].
|тип=journal
⚫
|автор=Joung J., Ramm E., Pabo C.
⚫
|год=2000
|archivedate=2008-05-02
|archiveurl=https://web.archive.org/web/20080502172825/http://www.pnas.org/cgi/content/full/97/13/7382
}}</ref>


=== Water testing ===
=== Исследование воды ===
X-Gal используют для определения ''E. coli'' и родственных бактерий в образцах воды.
In addition to use in molecular biology, X-Gal is used to determine ''E. coli'' and [[coliform]] content in drinking water samples.


== Примечания ==
== Примечания ==
{{примечания}}
{{примечания}}


{{mol_bio-stub}}
[[Категория:Галактозиды]]
[[Категория:Индолы]]
⚫
[[Категория:Методы молекулярной биологии]]


⚫
[[Категория:Методы молекулярной биологии]]
[[de:5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid]]
[[es:X-gal]]
[[fr:X-gal]]
[[it:X-gal]]
[[ja:5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド]]

Текущая версия от 05:52, 17 июня 2023

5-​бромо-​4-​хлоро-​3-​индоил-​бета-​D-​галактопиранозид
Изображение химической структуры
Общие
Систематическое
наименование		 5-​бромо-​4-​хлоро-​3-​индоил-​бета-​D-​галактопиранозид
Хим. формула C14H15BrClNO6
Физические свойства
Молярная масса 408,629 г/моль
Классификация
Рег. номер CAS 7240-90-6
PubChem 65181
Рег. номер EINECS 230-640-8
SMILES
 
InChI
 
ChEBI 75055
ChemSpider 58680
Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное.
Логотип Викисклада Медиафайлы на Викискладе

X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.

Применение

[править | править код]

Клонирование

[править | править код]

X-gal используют при клонировании генов для определения экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.

X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.

X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ синтезируется под действием индуктора IPTG, а синее окрашивание теряется у клеток, содержащих генно-инженерную конструкцию, в которой ген lacZ нарушен в результате генетической вставки.

Репортер

[править | править код]

Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащей X-gal. В случае, когда промотор гена-мишени связан с кодирующей частью гена галактозидазы, связывание белка-активатора с промотором, приводит к образованию окрашенного продукта расщепления X-gal.[1]

Исследование воды

[править | править код]

X-Gal используют для определения E. coli и родственных бактерий в образцах воды.

Примечания

[править | править код]
  1. ↑ Joung J., Ramm E., Pabo C. A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2000. — Vol. 97, no. 13. — P. 7382—7387. — doi:10.1073/pnas.110149297. — PMID 10852947. — PMC 16554. Архивировано 2 мая 2008 года.
Источник — https://ru.wikipedia.org/ruwiki/w/index.php?title=X-gal&oldid=131093400