X-gal
5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид | |
---|---|
Общие | |
Систематическое наименование |
5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид |
Хим. формула | C14H15BrClNO6 |
Физические свойства | |
Молярная масса | 408,629 г/моль |
Классификация | |
Рег. номер CAS | 7240-90-6 |
PubChem | 65181 |
Рег. номер EINECS | 230-640-8 |
SMILES | |
InChI | |
ChEBI | 75055 |
ChemSpider | 58680 |
Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное. | |
Медиафайлы на Викискладе |
X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.
Применение
Клонирование
X-gal используют при клонировании генов для определения экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.
X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.
X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ синтезируется под действием индуктора IPTG, а синее окрашивание теряется у клеток, содержащих генно-инженерную конструкцию, в которой ген lacZ нарушен в результате генетической вставки.
Репортер
Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащей X-gal. В случае, когда промотор гена-мишени связан с кодирующей частью гена галактозидазы, связывание белка-активатора с промотором, приводит к образованию окрашенного продукта расщепления X-gal.[1]
Исследование воды
X-Gal используют для определения E. coli и родственных бактерий в образцах воды.
Примечания
- ↑ Joung J., Ramm E., Pabo C. A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2000. — Vol. 97, no. 13. — P. 7382—7387. — doi:10.1073/pnas.110149297. — PMID 10852947. — PMC 16554.
Это заготовка статьи по молекулярной биологии. Помогите Википедии, дополнив её. |