X-gal

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
Это старая версия этой страницы, сохранённая Sirozha (обсуждение | вклад) в 09:55, 14 декабря 2010 (Reporter). Она может серьёзно отличаться от текущей версии.
Перейти к навигации Перейти к поиску
X-​gal
Изображение химической структуры
Общие
Систематическое
наименование
5-​бромо-​4-​хлоро-​3-​индоил-​бета-​D-​галактопиранозид
Хим. формула C14H15BrClNO6
Физические свойства
Молярная масса 408,629 г/моль
Классификация
Рег. номер CAS 7240-90-6
PubChem
Рег. номер EINECS 230-640-8
SMILES
InChI
ChEBI 75055
ChemSpider
Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное.
Логотип Викисклада Медиафайлы на Викискладе

X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.

Uses

[[Категория:Википедия:Ошибка выражения: неожидаемый оператор <, редактируемые прямо сейчас]]

Клонирование

X-gal используют при клонировании генов для экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.

X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.

X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ не синтезируется, поэтому синее окрашивание имеют только клетки, содержащие генно-инженерную конструкцию.

Репортер

Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при условии выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащией X-gal. In two-hybrid analysis for example, it is necessary to distinguish between those yeast or bacteria in which there is a successful interaction, leading to the binding of an activation domain to a promoter, and those in which there is not. If the promoter is linked to a lacZ gene, the production of β-galactosidase will be indicated by the production of blue pigment by colonies that host a successful interaction.[1] Due to its manual nature, this technique is limited to situations in which the number of colonies that must be distinguished is less than around 106.[1] The successful cleavage of X-gal also creates a noticeably foul odor due to the volatilization of indole.

Water testing

In addition to use in molecular biology, X-Gal is used to determine E. coli and coliform content in drinking water samples.

Примечания

  1. 1 2 Joung J, Ramm E, Pabo C (2000). "A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions". Proc Natl Acad Sci USA. 97 (13): 7382—7. doi:10.1073/pnas.110149297. PMC 16554. PMID 10852947.{{cite journal}}: Википедия:Обслуживание CS1 (множественные имена: authors list) (ссылка)