X-gal
| X-gal | |
|---|---|
 | |
| Общие | |
| Систематическое наименование |
5-бромо-4-хлоро-3-индоил-бета-D-галактопиранозид |
| Хим. формула | C14H15BrClNO6 |
| Физические свойства | |
| Молярная масса | 408,629 г/моль |
| Классификация | |
| Рег. номер CAS | 7240-90-6 |
| PubChem | 65181 |
| Рег. номер EINECS | 230-640-8 |
| SMILES | |
| InChI | |
| ChEBI | 75055 |
| ChemSpider | 58680 |
| Приведены данные для стандартных условий (25 °C, 100 кПа), если не указано иное. | |
 Медиафайлы на Викискладе | |
X-gal (также BCIG от англ. bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside) — органическое соединение, состоящее из галактозы, соединенной с индолом. Очень широко используется в качестве субстрата для бета-галактозидаз в генетической инженерии и молекулярной биологии.
Uses
 | Раздел в данный момент активно редактирует участник Sirozha.ru. |
[[Категория:Википедия:Ошибка выражения: неожидаемый оператор <, редактируемые прямо сейчас]]
Клонирование
X-gal используют при клонировании генов для экспрессии в клетке гена фермента β-галактозидазы, закодированного в гене lacZ.
X-gal расщепляется β-галактозидазами, при этом образуется галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-гидроксииндол. Последний окисляется в 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, нерастворимый окрашенный продукт. В чашку Петри или культуральный флакон вносят X-gal совместно с индуктором β-галактозидаз, например, IPTG.
X-gal позволяет визуально определить, какие из колоний E. coli трансформированы нужным вектором. В норме в клетках E. coli фермент, закодированный геном lacZ не синтезируется, поэтому синее окрашивание имеют только клетки, содержащие генно-инженерную конструкцию.
Репортер
Ген lacZ может быть использован в качестве репортерного, при условии выращивания бактерии или дрожжей на среде, содержащией X-gal. In two-hybrid analysis for example, it is necessary to distinguish between those yeast or bacteria in which there is a successful interaction, leading to the binding of an activation domain to a promoter, and those in which there is not. If the promoter is linked to a lacZ gene, the production of β-galactosidase will be indicated by the production of blue pigment by colonies that host a successful interaction.[1] Due to its manual nature, this technique is limited to situations in which the number of colonies that must be distinguished is less than around 106.[1] The successful cleavage of X-gal also creates a noticeably foul odor due to the volatilization of indole.
Water testing
In addition to use in molecular biology, X-Gal is used to determine E. coli and coliform content in drinking water samples.
Примечания
- ↑ 1 2 Joung J, Ramm E, Pabo C (2000). "A bacterial two-hybrid selection system for studying protein-DNA and protein-protein interactions". Proc Natl Acad Sci USA. 97 (13): 7382—7. doi:10.1073/pnas.110149297. PMC 16554. PMID 10852947.
{{cite journal}}: Википедия:Обслуживание CS1 (множественные имена: authors list) (ссылка)