Культура клеток

Материал из Википедии — свободной энциклопедии
(перенаправлено с «Клеточная культура»)
Перейти к навигации Перейти к поиску
Окрашенная культивация клеток эпителия. На фото кератин (красный) и ДНК (зелёная)

Культивирование клеток представляет собой процесс, посредством которого in vitro отдельные клетки (или единственная клетка) прокариот и эукариот выращиваются в контролируемых условиях. На практике термин «культура клеток» относится в основном к выращиванию клеток, относящихся к одной ткани, полученных от многоклеточных эукариот, чаще всего животных. Историческое развитие технологии и методик выращивания культур клеток неразрывно связаны с выращиванием тканевых культур и целых органов.

В XIX веке английский физиолог С. Рингер разработал солевой раствор[1], содержащий хлориды натрия, калия, кальция и магния для поддержания биения сердца животных вне организма. В 1885 году Вильгельм Ру установил принцип культивирования тканей, извлек часть костного мозга из куриного эмбриона и держал его в теплом физрастворе в течение нескольких дней[2]. Росс Гранвилл Харрисон, работавший в Медицинской школе Дж. Хопкинса, а затем в Йельском университете, опубликовал результаты своих экспериментов в 1907 −1910 годах, создав методологию культивирования тканей. В 1910 г. Пейтон Раус, работая с культурой клеток саркомы цыплёнка, индуцировал образование опухолей у здоровых животных. Позже это привело к открытию онкогенных вирусов (Нобелевская премия по физиологии или медицине 1966 г.).

Методы культивирования клеток получили значительное развитие в 1940-х 1950-х годах в связи с исследованиями в области вирусологии. Выращивание вирусов в культурах клеток дало возможность получения чистого вирусного материала для производства вакцин. Вакцина против полиомиелита стала одним из первых препаратов, массово произведённых с использованием технологии культивирования клеток. В 1954 г. Эндерс, Уэллер и Роббинс получили Нобелевскую премию «За открытие способности вируса полиомиелита расти в культурах различных тканей». В 1952 г. была получена широко известная линия раковых клеток человека HeLa.

Основные вехи в развитии метода культуры тканей

[править | править код]

1885 — Ру (Roux) продемонстрировал возможность поддержания клетками куриного эмбриона жизнеспособности вне тела животного в солевом растворе[3].

1907 — Гаррисон (Harrison) культивировал спинной мозг амфибий в сгустке плазмы. Он пытался показать, что аксоны образуются в виде выростов отдельных нервных клеток[3].

1910 — Раус (Raus) с применением фильтрованного экстракта куриной опухоли индуцировал опухоль. Позднее было показано, что в основе такого эффекта лежал РНКовый вирус саркомы Рауса[3].

1913 — Каррель (Carrel) доказал, что в асептических условиях клетки могут расти в культуре в течение длительного времени, если их обеспечить необходимыми питательными веществами[3].

1948 — Эрл (Earle) и сотрудники установили, что одиночные клетки линии L в культуре формируют клоны клеток[3].

1952 — Джей (Gey) и сотрудники получили перевиваемую клеточную линию из карциномы шейки матки; эта клеточная линия широко известна как HeLa[3].

1954 — Леви-Монтальчини (Levy-Montalchini) и сотрудники показали, что в культуре ткани фактор, стимулирующий рост нервов, вызывает рост аксонов[3].

1955 — Игл (Eagle) - впервые систематически исследовал пищевые потребности клеток в условиях культуры ткани и обнаружил, что клетки животных способны существовать в определенной смеси низкомолекулярных веществ, дополненной некоторым количеством белков сыворотки[3].

1956 — Пак (Puck) и сотрудники отобрали мутантные клетки HeLa, потребности которых для роста в культуре существенно отличались от потребностей других клеток[3].

1958 — Темин и Рубин (Temin, Roubin) количественно описали инфицирование клеток цыпленка в культуре очищенным вирусом саркомы Рауса. В течение следующего десятилетия Стокер, Дульбекко, Грин (Stocker, Dulbecco, Green) и другие вирусологи установили основные характеристики вирусной трансформации различных типов[3].

1961 — Хайфлик и Мурхед (Hayflick, Moorhend) показали, что в культуре фибробласты человека погибают после определенного числа делений[3].

1964 — Литлфилд (Littlefield) впервые использовал для выращивания гибридов соматических клеток селективную среду HAT. Это нововведение в сочетании с методом гибридизации клеток позволило приступить к изучению генетики соматических клеток[3].

1964 — Като и Такеуши (Kato, Takeuchi) получили целое растение моркови из растущей в культуре тканей клетки корня[3].

1965 — Хэм (Ham) предложил бессывороточную среду определенного химического состава, которая способна поддерживать рост клонов некоторых клеток животных[3].

1965 — Харрис и Уоткинс (Harris, Watkins) индуцировали вирусом слияние клеток мыши и человека и получили первые гетерокарионы клеток млекопитающих[3].

1968 — Августи-Точчо и Сато (Augusti-Tocco, Sato) адаптировали к условиям культуры клеток опухолевые клетки мыши (нейробластомы) и выделили клоны, которые реагировали на раздражение электрическим током и разрастались в нервные волокна. Одновременно получено большое количество других дифференцированных клеточных линий, включая линии скелетных мышц и печени[3].

1975 — Келер и Мильштейн (Kehler, Milstein) получили первые клеточные линии гибридом, секретирующих моноклональные антитела[3].

1976 — Сато (Sato) и сотрудники опубликовали первую серию статей, в которых было показано, что для роста в бессывороточной среде разным клеточным линиям необходимы различные смеси гормонов и факторов роста[3].

Основные принципы культивирования

[править | править код]

Выделение клеток

[править | править код]

Для культивирования вне организма живые клетки могут быть получены несколькими способами. Клетки могут быть выделены из крови, но к росту в культуре способны только лейкоциты. Моноядерные клетки могут быть выделены из мягких тканей с помощью таких ферментов, как коллагеназа, трипсин, проназа, разрушающих внеклеточный матрикс[4]. Кроме того, в питательную среду можно поместить кусочки тканей и материалов.

Культуры клеток, взятых непосредственно от объекта (ex vivo), называются первичными[5]. Большинство первичных клеток, за исключением опухолевых, имеют ограниченный срок использования. После определённого количества делений такие клетки стареют и прекращают делиться, хотя могут при этом сохранить жизнеспособность.

Существуют иммортализованные («бессмертные») линии клеток, способные размножаться бесконечно. У большинства опухолевых клеток эта способность является результатом случайной мутации, но у некоторых лабораторных клеточных линий она приобретена искусственно, путём активации гена теломеразы[6][7].

Культивирование клеток

[править | править код]

Клетки выращивают в специальных питательных средах, при постоянной температуре. Для культур растительных клеток используется регулируемое освещение, а для клеток млекопитающих обычно необходима также специальная газовая среда, поддерживаемая в инкубаторе клеточных культур[8][9]. Как правило, регулируется концентрация в воздухе углекислого газа и паров воды, но иногда также и кислорода. Питательные среды для разных культур клеток различаются по составу, pH, концентрации глюкозы, составу факторов роста и др[10]. Факторы роста, используемые в питательных средах для клеток млекопитающих, чаще всего добавляют вместе с сывороткой крови. Одним из факторов риска при этом является возможность заражения культуры клеток прионами или вирусами. При культивировании одной из важных задач является исключение или сведение к минимуму использование заражённых ингредиентов. Однако на практике это бывает достигнуто не всегда. Наилучшим, но и наиболее дорогостоящим способом является добавление вместо сыворотки очищенных факторов роста[11].

Клетки можно выращивать в суспензии, либо в адгезивном состоянии. Некоторые клетки (такие, как клетки крови) в естественных условиях существуют во взвешенном состоянии. Существуют также линии клеток, искусственно изменённых таким образом, чтобы они не могли прикрепляться к поверхности; это сделано для того, чтобы увеличить плотность клеток в культуре. Для выращивания адгезивных клеток требуется поверхность, например, культура ткани, или пластик, покрытый элементами внеклеточного матрикса для улучшения адгезивных свойств, а также для стимулирования роста и дифференцировки. Большинство клеток из мягких и твердых тканей адгезивны. Из адгезивного типа культуры выделяются органотипические культуры клеток, которые представляют собой трёхмерную среду, в отличие от обычной лабораторной посуды. Эта система культивирования физически и биохимически наиболее сходна с живыми тканями, но имеет некоторые технические сложности в обслуживании (например, нуждается в диффузии). С целью обеспечения необходимых физических условий для культивирования адгезивных культур и заселения объёма внеклеточного матрикса тканеинженерных конструкций используются системы динамического культивирования[12] на основе роторных и вихревых биореакторов, биореакторов с непосредственным на скаффолд: компрессионных биореакторов, биореакторов с механическим натяжением и гидростатическим давлением, специальных биореакторов для электростимуляции клеток и тканей, а также комбинированных биореакторов[13].

Перекрёстное загрязнение клеточных линий

[править | править код]

При работе с клеточными культурами учёные могут столкнуться с проблемой перекрёстного загрязнения.

Особенности выращивания клеток

[править | править код]

При выращивании клеток, из-за постоянного деления может возникнуть их переизбыток в культуре, и, как следствие, возникают следующие проблемы:

  • Накопление в питательной среде продуктов выделения, в том числе токсичных.
  • Накопление в культуре омертвевших клеток, прекративших жизнедеятельность.
  • Скопление большого количества клеток оказывает негативное влияние на клеточный цикл, рост и деление замедляются, а клетки начинают стареть и отмирать (контактное ингибирование роста).
  • По той же причине может начаться клеточное дифференцирование.

Для поддержания нормального функционирования культур клеток а также для предотвращения негативных явлений периодически проводят замену питательной среды, пассирование и трансфекция клеток. Во избежание загрязнения культур бактериями, дрожжами, или другими линиями клеток, все манипуляции обычно проводят с соблюдением правил асептики в стерильном боксе. Для подавления микрофлоры в питательную среду могут быть добавлены антибиотики (пенициллин, стрептомицин) и противогрибковые препараты (амфотерицин B).

Одним из продуктов метаболизма в клетках являются кислоты, вследствие чего pH среды постепенно снижается. Для контроля кислотности питательных сред, в них добавляют индикаторы pH.

Если культура клеток адгезивная, питательную среду можно полностью заменять.

Пассирование клеток

[править | править код]

Пассирование (разделение) клеток — это отбор небольшого количества клеток для выращивания в другом лабораторном сосуде. Если культура быстро растет, это необходимо делать регулярно, поскольку в среде истощаются питательные вещества и накапливаются продукты метаболизма. Суспензивные культуры пассировать проще, так как для этого достаточно всего лишь отобрать необходимое количество клеток, поместить их в другие сосуды, и добавить свежей питательной среды. Адгезивные же клетки перед этим следует отделить от субстрата и разделить их скопления. Чаще всего для этой цели используют смесь трипсина и ЭДТА или другие ферментные смеси, иногда достаточно только ЭДТА в физиологическом растворе (раствор Версена). Если культура растет медленно, её обычно подкармливают без переноса в другой сосуд, периодически (обычно раз в 2-3 дня) отбирая часть использованной среды и добавляя свежую.

Трансфекция и трансдукция

[править | править код]

В клетки при их выращивании можно внедрять чужеродную ДНК путём трансфекции (невирусный метод). Часто данную технологию применяют для управляемой экспрессии генов. Сравнительно недавно для этих целей была успешно реализована трансфекция иРНК.

ДНК также может быть внедрена в геном клетки с помощью вирусов или бактериофагов. Они, являясь внутриклеточными паразитами, как нельзя лучше подходят для этих целей, так как внедрение генетического материала в клетку-хозяина является обычной частью их жизненного цикла[14]. Этот метод называется трансдукция.

Линии клеток человека

[править | править код]
Одна из самых ранних культур клеток человека, полученная от Генриетты Лакс, которая умерла от рака шейки матки. Культура клеток HeLa окрашена по Хойсту. Изменённые ядра окрашены в синий цвет.

Культивирование человеческих клеток несколько противоречит правилам биоэтики, поскольку изолированно выращиваемые клетки могут пережить родительский организм, а затем использоваться для проведения экспериментов или для разработки новых методов лечения и извлечения из этого прибыли. Первое судебное решение в данной области было вынесено в Верховном суде штата Калифорния по делу «Джон Мур против представителей Калифорнийского университета», согласно которому пациенты не имеют никаких прав собственности на линии клеток, полученных из органов, удалённых с их согласия[15].

Гибридома — это линия клеток, полученная в результате слияния нормальных лимфоцитов с «бессмертными» раковыми клетками. Используется для получения моноклональных антител. Лейкоциты, выделенные из селезёнки или крови иммунизированных животных, производят антитела с необходимой специфичностью, но как у любой первичной культуры, их способность к пролиферации ограничена пределом Хейфлика. Для иммортализации их искусственно сливают с «бессмертной» линией клеток миеломы, в результате чего происходит рекомбинация признаков. После этого линию клонируют и отбирают клоны, способные одновременно к неограниченной пролиферации и производящие антитела против избранного антигена.

Использование клеточных культур

[править | править код]

Массовое культивирование клеток является основой для промышленного производства вирусных вакцин и разнообразных продуктов биотехнологии.

Продукты биотехнологии

[править | править код]

Промышленным методом из культур клеток получают такие продукты, как ферменты, синтетические гормоны, моноклональные антитела, интерлейкины, лимфокины, противоопухолевые препараты. Хотя многие простые белки относительно просто могут быть получены с использованием рДНК в бактериальных культурах, более сложные белки, такие как гликопротеины, в настоящее время могут быть получены только из животных клеток. Одним из таких важнейших белков является гормон эритропоэтин. Стоимость выращивания культур клеток млекопитающих является довольно высокой, поэтому в настоящее время проводятся исследования по возможности производства сложных белков в культурах клеток насекомых или высших растений.

Тканевые культуры

[править | править код]

Культивирование клеток является неотъемлемой частью технологии культивирования тканей и тканевой инженерии, поскольку именно оно определяет основы выращивания клеток и поддержания их в жизнеспособном состоянии ex vivo.

С применением методики культивирования клеток в настоящее время выпускаются вакцины против полиомиелита, кори, эпидемического паротита, краснухи, ветрянки. Вследствие угрозы пандемии гриппа, вызываемого штаммом вируса H5N1, в настоящий момент правительство Соединённых Штатов финансирует исследования по получению вакцины против птичьего гриппа с использованием клеточных культур.

Культуры клеток не млекопитающих

[править | править код]

Культуры клеток растений

[править | править код]

Культуры клеток растений, как правило, выращиваются либо в виде суспензии в жидкой питательной среде, либо в виде каллусной культуры на твердой питательной основе. Культивирование недифференцированных клеток и каллуса требует соблюдения определённого баланса гормонов роста растений ауксинов и цитокининов.

Бактериальные, дрожжевые культуры

[править | править код]

Для культивирования небольшого количества клеток бактерий и дрожжей клетки высеивают на твердую питательную среду на основе желатина или агар-агара. Для массового производства применяют выращивание в жидких питательных средах (бульонах).

Вирусные культуры

[править | править код]

Культуры вирусов выращивают на культурах клеток млекопитающих, растений, грибов или бактерий, в зависимости от природного хозяина конкретного типа вирусов. Но при некоторых условиях могут быть выращены и в клетках другого типа.

В этом случае культура клеток сама служит средой для роста и репликации вируса.

Виды клеточных линий

[править | править код]

Краткий перечень клеточных линий

[править | править код]

Приведённый здесь список наиболее распространённых клеточных линий не является полным и исчерпывающим.

Линия клеток Расшифровка сокращения Организм Ткань Морфология Примечания и ссылки
293-T человек почка (эмбриональная) Производная от HEK-293 ECACC
3T3 cells «3-day transfer, inoculum 3 x 105 cells» мышь эмбриональные фибробласты Известна также как NIH 3T3 CLS ECACC
721 человек меланома
9L крыса глиобластома
A2780 человек яичник рак яичника ECACC
A2780ADR человек яичник производное A2780 с резистентностью к адриамицину ECACC
A2780cis человек яичник производное A2780 с резистентностью к цисплатину ECACC
A172 человек глиобластома злокачественная глиома CLS ECACC
A431 человек кожный эпителий плоскоклеточная карцинома CLS ECACCCell Line Data Base
A-549 человек карцинома лёгких эпителий CLS DSMZECACC
B35 крыса нейробластома ATCC (недоступная ссылка)
BCP-1 человек периферические лейкоциты HIV+ лимфома ATCC
BEAS-2B bronchial epithelium + adenovirus 12-SV40 virus hybrid (Ad12SV40) человек лёгкие эпителий ATCC (недоступная ссылка)
bEnd.3 brain endothelial мышь кора головного мозга эндотелий ATCC
BHK-21 «Baby Hamster Kidney» хомяк почка фибробласты CLS ECACCOlympus Архивная копия от 27 декабря 2009 на Wayback Machine
BR 293 человек молочная железа рак
BxPC3 Biopsy xenograph of pancreatic carcinoma line 3 человек панкреатическая аденокарцинома эпителий ATCC (недоступная ссылка)
C3H-10T1/2 мышь эмбриональные мезенхимальные клетки ECACC
C6/36 Aedes albopictus (комар) ткани личинки ECACC
CHO Chinese hamster ovary серый хомячок (Cricetulus griseus) яичник эпителий CLS ECACCICLC (недоступная ссылка)
COR-L23 человек лёгкие ECACC
COR-L23/CPR человек лёгкие ECACC
COR-L23/5010 человек лёгкие ECACC
COR-L23/R23 человек лёгкие эпителий ECACC
COS-7 Cercopithecus aethiops, origin-defective SV-40 обезьяна Cercopithecus aethiops почка фибробласты CLS ECACCATCC
CML T1 Chronic Myelod Leukaemia T-lymphocyte 1 человек хроническая миелоидная лейкемия T-клеточная лейкемия Blood
CMT canine mammary tumor собака молочная железа эпителий
D17 собака остеосаркома ECACC
DH82 собака гистиоцитоз моноциты/макрофаги ECACC

J Vir Meth

DU145 человек карцинома простата CLS
DuCaP Dura mater Cancer of the Prostate человек метастазирующий рак простаты эпителий 11317521
EL4 мышь T-клеточная лейкемия ECACC
EMT6/AR1 мышь молочная железа эпителий ECACC
EMT6/AR10.0 мышь молочная железа эпителий ECACC
FM3 человек метастазы в лимфатический узел меланома
H1299 человек лёгкие рак
H69 человек лёгкие ECACC
HB54 гибридома гибридома секретирует MA2.1 mAb (против HLA-A2 и HLA-B17) Journal of Immunology
HB55 гибридома гибридома секретирует L243 mAb (против HLA-DR) Human Immunology
HCA2 человек фибробласты Journal of General Virology
HEK-293 human embryonic kidney человек почка(эмбриональная) эпителий CLS ATCC
HeLa Henrietta Lacks человек рак шейки матки эпителий CLS DSMZECACC
Hepa1c1c7 clone 7 of clone 1 hepatoma line 1 мышь гепатома эпителий ECACC

ATCC (недоступная ссылка)

HL-60 human leukemia человек миелобласты клетки крови CLS ECACCDSMZ
HMEC human mammary epithelial cell человек эпителий ECACC
HT-29 человек эпителий толстого кишечника аденокарцинома HT-29 ECACC

Cell Line Data Base

Jurkat человек T-клеточная лейкемия белые клетки крови ECACC

DSMZ

JY человек лимфобласты В-клетки, иммортализованные EBV
K562 человек лимфобласты хроническая миелоидная лейкемия CLS ECACC
Ku812 человек лимфобласты эритролейкемия ECACC

LGCstandards

KCL22 человек лимфобласты хроническая миелоидная лейкемия
KYO1 Kyoto 1 человек лимфобласты хроническая миелоидная лейкемия DSMZ
LNCap Lymph node Cancer of the Prostate человек аденокарцинома простаты эпителий CLS ECACCATCC (недоступная ссылка)
Ma-Mel 1, 2, 3….48 человек линии клеток меланомы
MC-38 мышь аденокарцинома
MCF-7 Michigan Cancer Foundation-7 человек молочная железа инвазивная карцинома протоков молочной железы ER+, PR+ CLS
MCF-10A Michigan Cancer Foundation человек молочная железа эпителий ATCC
MDA-MB-231 M.D. Anderson — Metastatic Breast человек молочная железа рак ECACC
MDA-MB-468 M.D. Anderson — Metastatic Breast человек молочная железа рак ECACC
MDA-MB-435 M.D. Anderson — Metastatic Breast человек молочная железа меланома или карцинома (единого мнения нет) Cambridge Pathology ECACC
MDCK II Madin Darby canine kidney собака почка эпителий CLS ECACC ATCC
MOR/0.2R человек лёгкие ECACC
NCI-H69/CPR человек лёгкие ECACC
NCI-H69/LX10 человек лёгкие ECACC
NCI-H69/LX20 человек лёгкие ECACC
NCI-H69/LX4 человек лёгкие ECACC
NIH-3T3 National Institutes of Health, 3-day transfer, inoculum 3 x 105 cells мышь эмбрион фибробласты CLS ECACCATCC
NALM-1 периферическая кровь хроническая миелоидная лейкемия Cancer Genetics and Cytogenetics
NW-145 меланома ESTDAB Архивная копия от 16 ноября 2011 на Wayback Machine
OPCN / OPCT Onyvax [1] Prostate Cancer…. человек линии клеток рака простаты Asterand Архивная копия от 7 июля 2011 на Wayback Machine
Peer человек T-клеточная лейкемия DSMZ
PNT-1A / PNT 2 линии клеток рака простаты ECACC
RenCa Renal Carcinoma мышь карцинома почки CLS
RIN-5F мышь поджелудочная железа
RMA/RMAS мышь T-клеточный рак
Saos-2 человек остеоксаркома CLS ECACC
Sf-9 Spodoptera frugiperda бабочка Spodoptera frugiperda яичник CLS DSMZECACC
SkBr3 человек карцинома молочной железы CLS
T2 человек гибридома В-клеток и Т-клеточной лейкемии DSMZ
T-47D человек молочная железа карцинома протоков CLS
T84 человек карцинома толстого кишечника/ метастазы в легкое эпителий [2] ECACCATCC
THP1 человек моноциты острая миелоидная лейкемия CLS ECACC
U373 человек глиобластома-астроцитома эпителий
U87 человек глиобластома-астроцитома эпителий CLS Abcam
U937 человек лейкемическая моноцитарная лимфома CLS ECACC
VCaP Vertebra Prostate Cancer человек метастазирующий рак простаты эпителий ECACC ATCC Архивная копия от 19 февраля 2012 на Wayback Machine
Vero 'Vera Reno' ('почка зелёной') / 'Vero' ('истина') африканская зелёная мартышка эпителий почки CLS ECACC
WM39 человек кожа первичная меланома
WT-49 человек лимфобласты
X63 мышь меланома
YAC-1 мышь лимфома Cell Line Data Base CLS ECACC
YAR человек B-лимфоциты трансформированы EBV [3] Human Immunology Архивная копия от 20 сентября 2008 на Wayback Machine

Примечания

[править | править код]
  1. Раствор Рингера
  2. Архивированная копия. Дата обращения: 24 марта 2009. Архивировано из оригинала 1 сентября 2006 года.
  3. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Альбертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Робертс К., Уотсон Дж. — Молекулярная биология клетки: В 3-х т. 2-е изд., перераб. М75 и доп. Т. 1. Пер. с англ.-М.: Мир, 1994.-517 с., ил. ISBN 5-03-001985-5
  4. Клетки можно выделить из тканей и разделить на различные типы. Дата обращения: 24 марта 2009. Архивировано из оригинала 26 мая 2009 года.
  5. ЛабоRUтория. Культивирование клеток и тканей. www.primer.ru (2003). Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 10 мая 2003 года.
  6. Теломераза. Тёмная материя (15 сентября 2006). Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 20 декабря 2007 года.
  7. Maqsood MI, Matin MM, Bahrami AR, Ghasroldasht MM (2013). Immortality of cell lines: challenges and advantages of establishment. Cell Biology International. 37 (10), 1038–1045. doi:10.1002/cbin.10137 PMID 23723166
  8. Инкубаторы СО2 Binder (Германия). Техсервис. Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 19 ноября 2012 года.
  9. Лабораторное оборудование и расходные материалы. Инкубаторы (2007). Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 8 июня 2012 года.
  10. С помощью сред определённого химического состава можно идентифицировать специфические факторы роста. Дата обращения: 24 марта 2009. Архивировано из оригинала 10 ноября 2007 года.
  11. LipiMAX purified lipoprotein solution from bovine serum. Selborne Biological Services (2006). Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 8 июня 2012 года.
  12. Люндуп А.В., Демченко А.Г., Тенчурин Т.Х., Крашенинников М.Е., Клабуков И.Д., Шепелев А.Д., Мамагулашвили В.Г., Оганесян Р.В., Орехов А.С., Чвалун С.Н., Дюжева Т.Г. Повышение эффективности заселения биодеградируемых матриксов стромальными и эпителиальными клетками при динамическом культивировании // Гены и клетки. — 2016. — Т. 11, № 3. — С. 102—107. — ISSN 2313-1829.
  13. Гуллер А.Е., Гребенюк П.Н., Шехтер А.Б., Звягин А.В., Деев С.М. Тканевая инженерия опухолей с использованием биореакторных технологий // Acta Naturae (русскоязычная версия). — 2016. — Т. 8, № 3. — С. 49—65. — ISSN 2075-8243.
  14. Механизм инфицирования вируса
  15. В.Богомолова. Кому принадлежит наше тело? Arcanus (3 августа 2009). Дата обращения: 27 марта 2010. Архивировано 5 марта 2016 года.